Introducere
Cromatogramele obținute de către dumneavoastră nu mai arată la fel de bine și rezultatele sunt eronate? În acest scurt ghid vom explora o serie de situații comune și soluții rapide, astfel încât să remediați problema în cel mai scurt timp!
Dacă prin compararea cromatogramei actuale cu cele precendente ați constatat modificări semnificative în ceea ce privește aspectul peakurilor și al timpilor de retenție, cel mai probabil este vorba despre degradarea coloanei sau a precoloanei. Cele mai comune simptome prezente în acest caz sunt: deformarea peakurilor, scindarea peakurilor, apariția peakurilor cu umeri, pierderea rezoluției cromatografice, scăderea timpului de retenție și creșterea presiunii. Aceste simptome indică acumularea contaminanților în faza staționară sau în frita coloanei, degradarea umpluturii sau probleme de conexiune a capilarelor. Mai jos regăsiți o listă cu cele mai comune probleme și soluții. Acesta este doar un ghid rapid, pentru mai multă informație despre acest subiect, vă rugăm să accesați ghidul Agilent pentru toubleshooting HPLC :
| 1. Peak Fronting |  |
| Problema | Solutia |
| Coloană încărcată excesiv | · Diluați proba și reluați analiza. · Micșorați volumul de injecție din metoda de achiziție, dacă este posibil. |
| Efecte ale solventului de injecție | · În general, este recomandat ca solventul ales pentru probe să aibe compoziția fazei mobile, iar dacă acest lucru nu este posibil, se recomandă alegerea unui solvent cu o putere eluotropică mai mică decât faza mobilă. · Asigurați-vă că toți solvenții folosiți sunt miscibili în condițiile de lucru și nu cauzează precipitarea aditivilor din faza mobilă, dacă e cazul. |
| Complexarea ionilor metalici | · Folosiți agenți chelatizanți, precum EDTA pentru a complexa ionii metalici și a îmbunătății forma peakului. |
| 2. Peak Tailing |  |
| Problema | Solutia |
| Coloană contaminată | · Eliminați sărurile din coloană, dacă este cazul și spălați coloana cu un solvent organic, 100% ACN, MeOH sau i-PrOH. · Dacă folosiți o precoloană, schimbați precoloana prima dată. · Dacă acest lucru nu duce la îmbunătățirea formei peakului, schimbați coloana. · Evitați injecția de probe cu matrici complexe, încercați să utilizați SPE în pregătirea probei. |
| Degradarea coloanei | · Schimbați precoloana/coloana, echilibrați și repetați analiza. |
| Interacțiuni cu grupările silanol reziduale | · Creșteți pH-ul fazei mobile, dacă analitul este o amină – folosiți coloanele Agilent ZORBAX Extend, ce prezintă o rezistență mai mare la pH ridicat. · Utilizați coloane endcapped, ce prezintă un număr mai scăzut de grupări silanol. · Încercați metode ce presupun derivatizarea pre-coloană, astfel modificați proprietățile fizico-chimice ale analitului. |
| Uzarea garniturii rotorului valvei de injecție | · Garnitura trebuie înlocuită. |
| 3. Peak Splitting |  |
| Problema | Solutia |
| Coloană încărcată excesiv | · Diluați proba și reluați analiza. · Micșorați volumul de injecție din metoda de achiziție, dacă este posibil. |
| Component interferent | · Asigurați-vă că proba a fost pregătită corespunzător. · Ajustați parametrii metodei pentru ca separarea să se realizeze în condițiile unei matrici diferite. · Spălați și condiționați coloana. |
| Frită coloană blocată parțial | · Spălați coloana. · Schimbați precoloana sau coloana, după caz. |
| 4. Peak Broadening |  |
| Problema | Solutia |
| Capilare care nu au fost conectate corespunzător | · Verificați conexiunile capilarelor între autosampler-coloană și coloană-detector. |
| Capilare prea lungi | · Utilizați capilare mai scurte, dacă este posibil sau creșteți debitul de eluent. |
| Faza mobilă greșită | · Asigurați-vă că utilizați solvenții specificați în metoda de lucru. |
| Debit prea mic de eluent | · Creșteți debitul eluentului. |
Concluzie
Înainte de a rula analiza HPLC, pregătiți instrumentul conform metodei de lucru, instalați coloana potrivită și încărcați fazele mobile în sticlele din tava aparatului. Folosiți doar solvenți de puritate HPLC, standarde și reactivi de puritate înaltă și soluții filtrate în prealabil. Asigurați-vă că ați purjat traseele solvenților, astfel încât să nu mai existe bule de aer în sistem. Echilibrați coloana suficient înainte de a porni analiza și injectați doar probe pregătite în mod corespunzător. Pentru a crește durata de viață a coloanei, folosiți precoloanele Agilent potrivite.
Daca aveti intrebari sau doriti o oferta de pret ne puteti contacta la office.ro@altium.net
